我們應(yīng)用三氯化鋁對戊二醛(GA)處理的牛心包瓣進(jìn)行改良處理，探討處理后熱收縮溫度、力學(xué)特性及在大鼠皮下鈣化情況，結(jié)果報(bào)道如下。

材料與方法

1．牛心包獲取及分組處理：取3～4歲小牛新鮮心包，4℃生理鹽水沖洗后剔除表面結(jié)締組織。4小時(shí)內(nèi)行以下分組處理．①GA組；新鮮心包浸入4℃o．6%GA(pH7.4)內(nèi)，24小時(shí)后移入4℃0.2%GA(pH7.4)中，3周后待實(shí)驗(yàn)．②AICl3改良組：GA處理后心包片經(jīng)0.9%生理鹽水漂洗3×10分鐘后浸入O.lMAICl3(pH3．O)溶液中(25—30℃)48小時(shí)后實(shí)驗(yàn)待用。③PBS組；新鮮心包浸入4℃磷酸緩沖液(PBS)，(pH7.4)內(nèi)，實(shí)驗(yàn)待用。

2．熱收縮溫度測定：SW-1型收縮溫度測定儀測定各組心包熱收縮溫度。

3．力學(xué)分析：按Lee方法行力學(xué)分析，(Ml00型電子千能試驗(yàn)機(jī)，日本)測量。①10、20、60、100秒應(yīng)力保留值(Stessremaining'SR=Q(t)/Q(t=0)×100%，Q(t=O)為負(fù)荷600g時(shí)初始應(yīng)力值，Q(t)為各時(shí)間段應(yīng)力值）。②斷裂極限拉應(yīng)力(Ultimatetensilestrength，UTS)和斷裂應(yīng)變(Strainatfracture，SF-(△L/Lo)×100%，La為心包片初始長度，△L一斷裂時(shí)長度-Lo)。

4．大鼠皮下埋植鈣化實(shí)驗(yàn)：取剛斷奶Wistar大白鼠(4—5周齡，50—70g，雌雄不限)，隨機(jī)以時(shí)間段分組（埋植后7、21、60、90天）編號，按Levy方法行大鼠背部皮下埋植。普食飼養(yǎng)7、、21、60、90天處死大鼠行以下檢測；①鈣鋁定量：各時(shí)間段心包片取出后，日立180-80Zeem原子吸收光譜測定各組鈣含量及三氯化鋁改良處理前后各時(shí)間段心包Al3+含量。②組織學(xué)觀察；取各組埋植前后備時(shí)間段心包各一塊行HE及Van-kossa染色，光鏡觀察。取埋植前及埋植后90天心包片行透射電鏡觀察。

5．統(tǒng)計(jì)方法：各組數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)誤表示，以漢化SAS統(tǒng)計(jì)軟件包行F及q檢驗(yàn)．P<0.05為差異顯著，P

1．熱收縮溫度測定：AICl3改良處理心包的熱收縮溫度較GA處理組心包收縮溫度高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與PBS組比較，兩處理組熱收縮溫度均有極顯著提高(P<0.01)。

2．力學(xué)分析結(jié)果：見表1，三氯化鋁改良組與GA組各時(shí)間段應(yīng)力保留值以及極限拉應(yīng)力與斷裂應(yīng)變均顯著高于PBS組(P<0.01)，三氯化鋁改良組與GA組心包片各力學(xué)指標(biāo)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

3．鈣化結(jié)果：(1)鈣含量測定：如表2，常規(guī)GA處理組牛心包在大鼠皮下鈣含量進(jìn)行性增加，三氯化鋁改良處理則極顯著抑制這種鈣化發(fā)生。自皮下埋植第21天起，三氯化鋁改良組心包鈣含量極顯著低于GA組(P<0.01)。(2)埋植前各組心包在光鏡HE、Von-kossa染色下無明顯差異，埋植90天HE、Von-kossa染色揭示GA組心包發(fā)生廣泛鈣化，透射電鏡揭示GA組心包膠原本身，膠原間質(zhì)及心包表面均發(fā)生鈣化，其形態(tài)呈片狀、針狀，與膠原纖維走型一致，PBS組，三氯化鋁改良組未發(fā)生鈣化。

4．三氯化鋁改良組心包三氯化鋁處理前后鋁含量有極顯著差異(P<0.01)，在大鼠皮下90天內(nèi)，AI3+無明顯變化(P>0.05)。

討論

三氯化鋁改良處理生物瓣機(jī)理目前尚不清楚，可能的機(jī)理是
1．Al3+與膠原蛋白羧基鉻合降低負(fù)電性，減少鈣離子結(jié)合。
2．Webb認(rèn)為Al3+競爭抑制Ca2+與磷結(jié)合，從而抑制晶核生長。熱收縮溫度是生物材料交聯(lián)度的一個(gè)間接度量，本實(shí)驗(yàn)中Al3+處理可提高生物瓣收縮溫度，但與GA組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與可能因GA與膠原纖維膠聯(lián)密度大，Al3+在膠聯(lián)作用上貢獻(xiàn)不大。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：三氯化鋁改良處理可有效抑制鈣化發(fā)生，且不減低GA處理后牛心包瓣良好的力學(xué)特性，Al3+與牛心包結(jié)合緊密，在大鼠皮下埋植90天內(nèi)未見明顯丟失，可穩(wěn)定地發(fā)揮其抗鈣化作用。